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人腫瘤壞死因子α高敏 ELISA 試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作

更新時間：2020-06-16 點擊次數(shù)：1319次

　　人腫瘤壞死因子α高敏 ELISA 試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作:

　　1、請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

　　2、將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié) 晶，屬于正常現(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用。

　　1、使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。

　　2、標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為1000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，依次倍比稀釋成不同的梯度,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。人腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

　　4、生物素化抗體工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

　　5、酶結(jié)合物工作液：實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應(yīng)多配制 100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

　　人腫瘤壞死因子α高敏 ELISA 試劑盒操作程序：

　　1、棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。

　　2、每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.。

　　3、取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

　　4、測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

　　5、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

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